主要用于神經(jīng)生長因子(NGF)等神經(jīng)營養(yǎng)因子的生物活性測定。在差倒置顯微鏡下觀察以神經(jīng)突起的生長長度和密度為指標(biāo)半定量評估NGF的活性。
1、材料和方法
(1)選正常受精的雞蛋,置于37℃生化培養(yǎng)箱內(nèi)孵化,每日翻動雞蛋一次。
(2)取孵化8-12 d 的雞蛋, 用70% 酒精消毒蛋殼,從氣室端敲開蛋殼,用消毒鑷剝除氣室部蛋殼。
(3)用彎鑷鉤住雞胚頸部,無菌條件下取出雞胚置小平皿內(nèi),除去頭部后,腹側(cè)向上置滅菌毛玻璃片上,用眼科彎鑷子打開胸腹腔,除去內(nèi)臟器官。
(4)在解剖顯微鏡下,小心除去腹膜,暴露脊柱及其兩側(cè),在椎間孔旁可見到沿脊柱兩側(cè)排列的背根節(jié)(圖1),用一對5號微解剖鑷小心取出。
(5)置背根節(jié)于解剖溶液內(nèi),用微解剖鑷去除附帶組織,接種于涂有鼠尾膠的玻璃或塑料培養(yǎng)瓶中,在DMEM 無血清培養(yǎng)液中培養(yǎng)。
2、結(jié)果
雞胚背根神經(jīng)節(jié)在含神經(jīng)生長因子(NGF, 2.5S,20ng/ml)的無血清培養(yǎng)液中培養(yǎng)24 h,神經(jīng)節(jié)長出密集的神經(jīng)突起。而未加NGF的神經(jīng)節(jié)培養(yǎng)24 h, 未見神經(jīng)突起生長。
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