一、菌株培養(yǎng)
1、增菌培養(yǎng)
取供試液10ml(相當于供試品1g、ml、10cm2)直接或處理后接種至適量(不少于100ml)的沙氏葡萄糖肉湯培養(yǎng)基中,培養(yǎng)48~72小時。
2、分離培養(yǎng)
取上述培養(yǎng)物劃線接種于沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基平板上,培養(yǎng)24~48小時(必要時延長至72小時)。
二、結果判斷
1、白色念珠菌在沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基上生長的菌落呈乳白色偶見淡黃色,表面光滑有濃酵母氣味,培養(yǎng)時間稍久則菌落增大,顏色變深、質(zhì)地變硬或有皺摺。若平板上無菌落生長或生長的菌落與上述菌落形態(tài)特征不符,判供試品未檢出白色念珠菌。
2、如平板上生長的菌落與上述菌落形態(tài)特征相符或疑似,應挑選2~3個菌落分別接種至念珠菌顯色培養(yǎng)基平板上,培養(yǎng)24~48小時(必要時延長至72小時)。若平板上無綠色或翠綠色的菌落生長,判供試品未檢出白色念珠菌。
3、若平板上生長的菌落為綠色或翠綠色,挑取相符或疑似的菌落接種于1%吐溫80玉米瓊脂培養(yǎng)基上,培養(yǎng)24~48小時。取培養(yǎng)物進行染色,鏡檢及芽管試驗。
4、芽管試驗 挑取1%吐溫80玉米瓊脂培養(yǎng)基上的培養(yǎng)物,接種于加有一滴血清的載玻片上,蓋上蓋玻片,置濕潤的平皿內(nèi),置電熱恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)35~37℃、1~3h,置顯微鏡下觀察,可見到由孢子長出短小芽管。
5、若上述疑似菌為非革蘭陽性菌,顯微鏡未見厚膜孢子、假菌絲、芽管,判供試品未檢出白色念珠菌。
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