實驗方法原理:
質粒多為一些雙鏈、環(huán)狀的DNA分子,是獨立于細菌染色體之外進行復制和遺傳的輔助性遺傳單位。質粒是進行分子生物學實驗操作,進行遺傳工程改良物種等工作時zui主要的DNA載體。
提取質粒的基本步驟分為三步:
①細菌的培養(yǎng)和質粒的擴增
②細菌菌體的裂解
③質粒DNA的純化
實驗材料:
大腸桿菌
試劑、試劑盒:ris-Hcl EDTA葡萄糖 NaOHKAacNaAc異丙醇溶菌酶酚LB培養(yǎng)基
儀器、耗材:超凈工作臺、 培養(yǎng)箱、 搖床、 恒溫水浴鍋、臺式離心機、取液器、低溫冰箱、冷凍真空干燥機、電泳儀、水平電泳槽、紫外觀測儀
實驗步驟:
一、材料與試劑準備
1. 材料:大腸桿菌。
2. 儀器:超凈工作臺,培養(yǎng)箱,搖床,恒溫水浴鍋,臺式離心機,取液器一套,低溫冰箱,冷凍真空干燥機,電泳儀,水平電泳槽,紫外觀測儀。
3. 試劑:
(1)Solution I :25 mM Tris-Hcl(pH7.4),10 mM EDTA(pH8.0),50 mM葡萄糖,高壓滅菌,4℃保存。
(2)Solution II :0.2 M NaOH, 1%SDS 現配現用。
(3)Solution III :5 N KAc pH4.8,高壓滅菌,4℃保存。
(4)3 M NaAc pH5.2,高壓滅菌,4℃保存。
(5)異丙醇,溶菌酶(8 mg/ml),無水乙醇,70%乙醇,LB培養(yǎng)基,電泳試劑。